Sandarinimo ir užteršimo klausimai daugialypės ląstelių kultūros plokštelėse

Kelių šulinėlių ląstelių kultūros plokštelių pakrovimas ir tvarkymas:

Ląstelių kultūros plokštelė taip pat laikosi griežto asepsis principo atliekant ląstelių operacijas. Visos operacijos turi būti standartizuotos ir mokslinės ir nesukels papildomo poveikio ląstelių augimui. Dažniausia problema yra tai, kaip užtikrinti ląstelių vienodumą pridėjus mėginį ir sumažinant terpės keitimo poveikį ląstelių augimo būsenai.

Paklauskite:
96 ir 24 šulinėlių kultūros plokštelių ar Petri patiekalų dangteliai yra labai laisvi, o tai patogu ventiliacijai, tačiau ar paslysta ir bakterijos, pelėsiai ir kiti teršalai?

atsakymas:
Dangtis yra labai laisvas, kuris priklauso pusiau atvirai kultūrai, ir to tikslas yra vėdinti (iš tikrųjų tai padaryti CO2 už kultūros patiekalo ribų keičiasi su kultūros patiekalu ir palaiko kultūros PH vertę terpė).
Viskas turi privalumų ir trūkumų, kurie, be abejo, padidina taršos galimybę. Be to, dėl to skystis inde išgaruoja, o tai pastebėta tiksliam vaistų dozavimui. Todėl būtinos šios dvi priemonės: a. Inkubatoriaus oras turi būti švarus (įprasta ultravioletinė šviesa, alkoholio šveitimas ir inkubatorius turėtų būti atidarytas ir uždarytas kuo mažiau) b. Inkubatoriaus drėgmė visada turi būti 100% (kriauklė su steriliu distiliuotu vandeniu, dedamu į inkubatorių).
Kaip ir „Petri“ patiekalas, jis taip pat yra konteineris su apverstu dangčiu, ir jis nebus užterštas. Daugiausia dėl neigiamo oro srauto, kurį sukelia „L“ dangtelio kraštas, slėgio, yra mikroorganizmų, pritvirtintų prie dulkių, o oro srauto nešiojamos dulkės negali praeiti per dangtelio kraštą, kuris sukelia neigiamą slėgį. Ventiliacijos efektas yra tik difuzijuojant orą, ir joks oro srautas nebus generuojamas, todėl jis tik kvėpuos, o ne prasiskverbs į bakterijas.

Paklauskite:
Naudojant 24 šulinėlių plokštelę, kai kuriuose šuliniuose (ypač valomame suoliuke) atliekamos operacijos, o kituose šuliniuose yra ląstelių. Aš nerimauju, kad tai sukels užteršimą. Aš nežinau, į ką atkreipti dėmesį?

atsakymas:
Jei operacija yra standartizuota ypač švarus suolelis, ji turėtų būti gerai. Manau, kad jūs galite visiškai išnaudoti kultūros plokštės dangtį, pabandyti atskleisti tik valdomas skylutes ir uždengti kitas skylutes dangčiais.
Prieš naudodamiesi išsamiai apsvarstykite išsamiai ir panaudokite visas skylutes; Jei jums reikia naudoti tik keletą skylių, galite naudoti tik vieną pusę, o likusius uždengti dangčiu. Aš įpratęs pirmiausia naudoti dešinę skylę (patogu pridėti mėginių į dešinę ranką).

Veikdami naudokite keletą stiklinių skaidrių, kad pakeltumėte vieną lentos pusę, neuždengkite dangtelio visiškai, paprastai neturi problemų.
Netolygus ląstelių pasiskirstymas ir sprendimai

Paklauskite:
Ląstelės yra pasėjamos į kultūros plokštelę, o ląstelės visada susirenka į periferinę dalį, kaip su ja susidoroti?

atsakymas:
Ar galėčiau paklausti, kaip jūsų ląstelės yra maišomos? Ar tai pipetė, ar purtoma kultūros plokštele? Jei tai yra pastaroji, ir jei jis sukrėstas ratu, labai tikėtina, kad ląstelės bus įmestos į periferinę dalį dėl išcentrinės jėgos, todėl viduryje bus mažiau ląstelių. Daugiau nei keturios savaitės!
Čia yra geras būdas: prieš augindami sėklos plokštelę, įdėkite kultūros plokštelę į inkubatorių kelias valandas soties ir išimkite ją. Pasodinant ląsteles jėga turėtų būti lengva. Lėtai pridedant ląstelės suspensiją tekėti į plokštelės šulinius, o kultivuotos ląstelės iš esmės auga tolygiai. Nepamirškite niekada drebėti su purtykle, arba jūsų ląstelės susiburs taip, kaip jūs sakėte.
Kuo mažesnis kultūros plokštės skylės skersmuo, tuo akivaizdesnis šis reiškinys. Šis reiškinys neišvengiamas 24 ir 96 šulinėlių plokštelėms, nes skystis prilimpa prie sienos taip, kad šulinio kultūros tirpalas nesudarytų skysčio lygio, tačiau periferija yra aukšta, kaip ir įgaubtas veidrodis. Tačiau naudojant šias dvi angos plokšteles, dėl to, kad reikia papildomos intervencijos, neįmanoma pridėti pakankamai kultūros sprendimo, kad ląstelės kartu su kultūros tirpalu pasirodytų „kraštų surinkimas“. Tai priklauso nuo to, kokius rodiklius reikia pastebėti. Jei tai yra MTT, imunohistochemija paveiks rezultatus dėl ląstelių sluoksnio.
Virškinimo ląstelėse tolygiai atkreipkite dėmesį į pipetę, kad išvengtumėte ląstelių gumulėlių, ir turėtų pakakti kultūros tirpalo kiekio šulinyje. Paprastai pridėkite pakankamai kultūros tirpalo, kai inokuliuojate, ir pakeiskite sprendimą vieną kartą, kai pridedant intervenciją. Intervencijos tirpalo pridedamas kultūros tirpalo kiekis yra lygus kultūros tirpalo kiekiui inokuliacijos metu, šiuo atveju bus pagerintas „kraštų rinkinio“ reiškinys, todėl taip pat galite išbandyti.

Paklauskite:
Tai, ką padariau, buvo apnašų formavimo eksperimentas. Geriausia ląsteles skleisti vienodu sluoksniu. Daugelis skylių yra gerai, kai virusas yra pasėjamas, o kai kurios iš jų nėra vienodos. Ląstelių grupėje yra didelių skirtumų. Norėčiau jūsų paklausti, kokį metodą naudojate pridėdami ląsteles?

atsakymas:
Po virškinimo labai svarbu pipetes ląsteles į vienos ląstelės suspensiją! Įsitikinkite, kad kiekvieno šulinio ląstelių skaičius yra pastovus dalijant plokštelę!
Žinoma, yra ir apdorojimo veiksnių. Taip pat labai svarbus šulinių paralelizmas. Pvz., Pridėdami vaistą, sumaišykite vaistą po skiedimo, kad įsitikintumėte, jog kiekvieno šulinio koncentracija yra pastovi!
Be to, pridedant ląstelių ir vaistų, bandymo grupė ir kontrolinė grupė turėtų būti pridedama paeiliui, kad būtų išvengta ląstelių tankio ir vaisto koncentracijos skirtumo, kurį sukelia mėginių pridėjimo seka!

Paklauskite:
Pūtimas jau yra vienodas, tačiau planavimas, 6 skylės ir 24 skylės visada yra šiek tiek netolygios ir šiek tiek koncentruotos viduryje. Be to, akivaizdu, kad skaičiavimas atliekamas, o po dienos ar dviejų kiekvienos skylės tankis yra skirtingas, o tai paveiks aptikimą. Ar yra geras būdas?

atsakymas:
Jei naudojate „Pasteur“ pipetę, kiekvieną kartą per daug nesiurbite, nes pipetės ląstelės automatiškai nuskendo, dažnai pirmųjų kelių skylių ląstelių skaičius yra didelis, o ląstelių suspensija dažnai būna vienoda, o skystis bus Vykdykite S formos maršrutą.
Jei naudojate pipetę, patarimai turėtų būti apdoroti ir pašalinti, kad būtų išvengta ląstelių sugadinimo, kad kiekvieną kartą paimtas skystis atitiktų šulinį. Tiksliau pridėti skylę „vienas su kitu“ su antgaliu. Bet taip pat atkreipkite dėmesį į pakabos maišymą.

Norėdami nustatyti lygiagrečią grupę, n turi būti pakankamai didelė (galite ją apskaičiuoti).

Neslėpkite po dengimo, nes drebėjimas ląsteles sukaups link centro. Geriausia vieną kartą pamaloninti.

Portos ląstelių kultūros plokštelė „Yongyue Medical“ visada laikė kokybės kontrolę kaip įmonės gyvenimą ir nuolat tobulino įmonės konkurencingumą. Bendrovė visada laikosi įmonės, kuria siekiama paklusti įstatymams ir kitiems teisės akcijoms, yra griežta savidisciplina, švelni ir išdrįsa prisiimti atsakomybę kaip standartą, veikiantį, palaikydama ir išplėsdama rinką puikios kokybės ir puikios paslaugos, ir patenkinti Klientų poreikiai didžiausia. . Win-Win su klientais yra mūsų plėtros tikslas. Yongyue Medical! Jūsų patikimas partneris. Mes norime nuoširdžiai bendradarbiauti su jumis, kad sukurtume geresnę ateitį.